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            Western Blot归一化讲座精彩内容提炼

            CYCLOUD发布时间:2020/08/18 10:49 点击: 加载中..

            期刊对Western Blot数据要求:

            1. 内参和目的蛋白在同一张印迹膜上;

            2. 最好选择膜染色进行总蛋白归一化;

            3. 如果使用看家蛋白,需要提供看家蛋白表达稳定并且不受实验条件影响的证据;

            4. 成像方法的线性范围需要提供。

            看家蛋白一般常用于内参质控,整张膜上的唯一质控标准,但是看家蛋白一般表达量比较高,可能与目的蛋白不在一个线性范围内,影响定量;并且看家蛋白证明在多种实验条件下是会发生变化,例如:细胞融合,疾病和药物治疗等等,影响定量精准性。

            总蛋白质控直接在膜上检测总蛋白,变异性小,误差小,动态范围更宽,使用整个泳道或泳道中大部分信号用于归一化,而不是单一的条带,例如JBC、Nature和Proteomics等期刊推荐使用总蛋白进行归一化。

            Azure可提供一站式Western Blot归一化解决方案。

            提供两种总蛋白染色试剂Azure Red和TotalStainQ进行膜染色和总蛋白归一化,AzureRed适合低丰度表达样品,TotalStain更适合细胞裂解液样品。

            Azure Sapphire双模式多光谱激光成像系统和Azure Imager多功能分子成像系统可进行总蛋白归一化,成像更简单,归一化更方便。

            Azure成像系统除了可进行Western Blot成像外,功能非常强大,可进行凝胶、In cell Western孔板成像、2D和2D-DIGE、微阵列芯片、切片、动植物组织、小鼠成像、放射性同位素磷屏成像等。



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